מחקרים

הפחתת תגובת חיישן ה-RNA לצורך ייצור mRNA סינתטי

חוקרים הדגימו כי שילוב של HiT7 RNAP ומודיפיקצייה נוקלאוטידית הפחית את תגובות חיישן ה-RNA התאי בתהליך הנועד ליישום טיפולי של mRNA סינתטיים

קיים היום ביקוש גבוה ל-mRNA סינתטיים משועתקים (transcribed) במבחנה (IVT) בשל יכולתם לשמש לתהליכי תרגום קליניים. במחקר שממצאיו פורסמו בכתב העת 'Frontiers in Bioengineering and Biotechnology', החוקרים אפיינו את תגובת חיישן ה-RNA התאי לצורך תהליך הייצור של mRNA על מנת לאפשר יישום טיפולי.

הליך הייצור של IVT mRNA באמצעות bacteriophage RNA polymerasesי(RNAP) הוא הליך לא מסובך באופן יחסי, וניתן להשתמש בו על מנת לייצר כמות גדולה בפרק זמן קצר. עם זאת, תכשירי ה-IVT mRNA מלווים במזהמים כגון RNA דו גדילי (dsRNA) כתוצרי לוואי המעוררים תגובות חיסוניות תאי לא רצויות על טרנספקציות. לכן, הסרה של מזהמי dsRNA מהווה תהליך קריטי בהכנות של IVT mRNA לצורך יישום טיפולי. שיטה אחת המשמשת למזעור מזהמים של dsRNA היא להשתמש בפולימראז בקטריופאג'ים מהונדסים גנטית ועמידים לחום, HiT7 RNAP אשר מבצע תגובת IVT בטמפרטורה גבוהה יותר מזו של השימוש הרגיל. עם זאת, אין אפיון בנוגע לתגובת חיישן ה-RNA התאי עבור תכשירי IVT mRNA עם HiT7 RNAP.

החוקרים השוו את תגובת חיישן ה-RNA התאי עבור mRNAs שהוכנו על ידי HiT7 RNAP (ב-50 מעלות צלזיוס) ו-SP6 RNAP (ב-37 מעלות צלזיוס) בתאי HeLa. החוקרים הראו כי תכשירי IVT mRNA על ידי HiT7 RNAP הפחיתו את רמות ה-dsRNA ואת תגובת החיישן ל-RNA הספציפי ל-dsRNAי(retinoic acid-inducible gene I, RIG-I and melanoma differentiation-associated 5, MDA5) בהשוואה לתכשירי ה-IVT mRNA על ידי SP6 RNAP. בדומה לכך, שילוב נוקלאוטידים של פסאודורידין במקום נוקלאוטידים של אורידין הפחית את תגובת החיישן ל-dsRNA והגדיל את תרגום ה-mRNA. בסך הכל, רמות תגובת חיישן ה-RNA בתיווך dsRNA נצפית בשיעור הנמוך ביותר כאשר mRNA מסונתז על ידי HiT7 RNAP ומשולב עם נוקלאוטידים של פסאודורידין.

מקור:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/Nagaraj S, Stankiewicz-Drogon A, Darzynkiewicz E, Grzela R. RNA sensor response in HeLa cells for transfected mRNAs prepared in vitro by SP6 and HiT7 RNA polymerases: A comparative study. Front Bioeng Biotechnol. 2022 Nov 3;10:1017934. doi: 10.3389/fbioe.2022.1017934. PMID: 36406230; PMCID: PMC9669293.
articles/PMC9669293/

נושאים קשורים:  מחקרים,  HCV RNA,  mRNA,  חיישן
תגובות